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Quais condições devem ser cumpridas pelo reagente quimioluminiscente utilizado como rótulo?
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No campo da bioanálise moderna e do diagnóstico médico,A imunologia quimioluminiscente (CLIA) tornou-se um método de detecção indispensável com as suas muitas vantagens, tais como alta sensibilidade e elevada especificidade.Como elemento central desta tecnologia, o desempenho do reagente quimioluminiscente utilizado como rótulo determina directamente os resultados do ensaio.Vamos falar sobre as condições-chave que o reagente quimioluminescente usado como um rótulo deve cumprir.

 

1Capacidade de participar em reacções quimioluminiscentes
1) Princípio de base da reação: os reagentes quimioluminiscentes devem ter as características inerentes de poderem participar em reações quimioluminiscentes,que é a raiz da geração de sinais de detecçãoComo um substrato luminescente relativamente ideal, ele pode ser oxidado por peróxido de hidrogênio em um ambiente alcalino para emitir luz.Este processo de reação redox envolve a transferência de elétrons, a quebra e formação de ligações químicas e, em última análise, conduz à libertação de energia sob a forma de luz.como o grupo éster ativo no éster de acridínioEles podem interagir especificamente com os oxidantes para iniciar o mecanismo de luminescência.Somente com tal reatividade o reagente quimioluminiscente pode gerar sinais luminosos em tempo útil e com precisão no sistema de imunoanálise de acordo com o evento específico de ligação do antígeno-anticorpo.

 

2) Efeito sobre a sensibilidade de detecção: a eficiência do reagente na reação quimioluminiscente está estreitamente relacionada com a sensibilidade.A alta reatividade significa que o processo de luminescência pode ser iniciado rapidamente na presença de uma menor concentração de reagentes para produzir uma intensidade de luz detectávelNo diagnóstico clínico, para a detecção de alguns biomarcadores, tais como marcadores tumorais e hormonas,Reagentes quimioluminiscentes são necessários para poder capturar de forma nítida as alterações sutis causadas pela ligação antígeno-anticorpo, e mesmo que o teor alvo na amostra seja extremamente baixo, pode ser refletido por um sinal luminescente forte e estável.Pode causar luminescência fraca ou instável, dificultando o sistema de detecção a distinção entre os sinais e o ruído de fundo, perdendo assim informações de diagnóstico importantes.

 

2Reagentes que podem formar conjugados estáveis após acoplamento com antígenos ou anticorpos
O acoplamento de reagentes quimioluminiscentes com antígenos ou anticorpos é uma etapa fundamental na construção de um sistema de imunodependência e é importante formar um conjugado estável.Isto requer uma sofisticada tecnologia de acoplamento químicoPor exemplo, as reacções químicas entre grupos activos, tais como a reacção de condensação entre grupos amino e carboxilo, a reacção de adição entre tiol e maleimida, etc.,pode ser utilizado para alcançar ligação covalente entre os doisDurante o processo de acoplamento, as condições de reacção, incluindo temperatura, valor de pH, concentração de reagente, etc.,devem ser rigorosamente controladas para assegurar a selectividade e eficiência da reação de acoplamento.
A partir da recolha de amostras, do armazenamento até à detecção, o conjugado deve resistir ao ensaio de diferentes factores ambientais, tais como flutuações de temperatura, alterações no pH da solução, etc.Se o conjugado for pouco estável, pode dissociar-se devido a ligeiras alterações de temperatura durante o transporte da amostra, fazendo com que o reagente quimioluminescente se separe do antígeno ou anticorpo,que não só reduzirá a sensibilidade de detecção, mas também pode causar resultados falsos negativos.

 

3O efeito quântico elevado e a dinâmica de reação ainda são mantidos após o acoplamento.
O efeito quântico determina a eficiência da geração de fótons do reagente quimioluminescente durante o processo de luminescência.O reagente após a acoplagem deve manter um efeito quântico tão elevado quanto possívelPara algumas amostras biológicas complexas, existem muitas substâncias interferentes, tais como proteínas, ácidos nucleicos,metabólitos, etc. Estas substâncias podem absorver e dispersar a luz, reduzindo a intensidade do sinal de detecção.Reagentes quimioluminescentes de efeito quântico elevado podem destacar o sinal alvo num ambiente tão complexo com a sua própria eficiente capacidade de geração de fótons, facilitando a identificação e quantificação pelo sistema de detecção.

 

4As propriedades físico-químicas do objecto rotulado não devem ser alteradas ou alteradas muito pouco
A protecção da actividade imunológica do objeto rotulado é um dos princípios fundamentais da aplicação de reagentes quimioluminiscentes.A actividade imunológica do antígeno é a base para o seu reconhecimento e ligação por anticorpos específicos, e a actividade imunológica do anticorpo está relacionada com a sua capacidade de captar com precisão o antígeno.Uma vez que o reagente quimioluminiscente altera excessivamente as propriedades físico-químicas do objeto rotulado durante o processo de acoplamento, tais como distorcer a conformação do antígeno e proteger o local de ligação do anticorpo, diminuirá a afinidade antígeno-anticorpo,e até mesmo a capacidade de resposta imune será perdida.

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