Amortecedor biológico Trometamol da base 77-86-1 de Tris

Base Tris 77-86-1 tampão biológico trometamol

Utilizações do tampão Tris na eletroforese de proteínas e Western Blotting

Os tampões Tris são parte integrante da eletroforese de proteínas e do blotting ocidental.Todos os tampões comuns estão disponíveis pré-misturados, ou, se preferir fazer o seu próprio tampão Tris, pode começar com pó Tris purificado, glicina e outros reagentes tampão de biologia molecular.

A maioria dos géis SDS usa um sistema tampão Tris descontínuo.8Neste pH, os íons cloreto ionizados migram rapidamente, elevando o pH atrás deles e criando um gradiente de tensão com uma zona de baixa condutividade,que faz com que a glicina (do tampão em curso) se ionize e migre para trás da frente do cloretoA maioria dos peptídeos da amostra, que têm uma carga negativa devido ao SDS ligado, migram entre o cloreto e a glicina, formando uma faixa estreita e, assim, ficando "empilhados".

Uma vez que a pilha atinge o gel de solução, que está em um pH mais alto (tipicamente pH 8,7 ∼ 8,8), o aumento da ionização da glicina faz com que ela acelere e ultrapasse os peptídeos.o menor tamanho dos poros do gel de solução começa a ter um efeito de peneira, resultando na separação dos peptídeos por tamanho.

A maioria dos protocolos de blotting ocidentais usa um tampão Tris de baixa força iônica para a transferência de proteínas.

Utilização do tampão Tris na eletroforese por agarose de ácido nucleico

Os tampões Tris são amplamente usados para eletroforese de agarose de DNA.Embora existam algumas diferenças na resolução de diferentes formas de DNA e sua mobilidade durante a eletroforeseOs íons borato em TBE inibem muitas enzimas, então sem realizar algum tipo de purificação de DNA após a eletroforese,Algumas manipulações a jusante mediadas por enzimas podem não funcionarPortanto, o tampão TAE é preferido para uso diário na maioria dos laboratórios de DNA.

Fazer um tampão Tris

O tampão Tris é uma boa escolha para a maioria dos sistemas biológicos porque tem um pKa de aproximadamente 8,1 a 25 °C, tornando-o um tampão eficaz na faixa de pH 7 ̊9.Esta faixa de pH é adequada para a maioria dos processos biológicosO pó de Tris é também mais barato e mais robusto do que tampões mais especializados, como o HEPES.

Há duas maneiras de fazer uma solução tampão Tris. uma é fazer soluções de Tris base e Tris HCl, ambos na concentração desejada,e, em seguida, adicionar aliquotas de uma solução (geralmente Tris HCl) à outra solução (geralmente Tris base), monitorizando o pH até se obter o pH corretoNa prática, isto é muito raramente feito.

O método habitual para fazer a maioria dos tampões Tris comumente usados é começar apenas com base Tris. A quantidade apropriada de pó Tris é dissolvida em água, o pH é ajustado com HCl,e então o buffer é feito até o volume desejadoAssumindo que não haja excesso durante o ajuste do pH, este método não altera a força iónica.ou utilizando Tris HCl e ajustando o pH com NaOHDependendo da utilização prevista do tampão Tris, tal alteração pode ou não ser importante.

Ao fazer um tampão Tris, é importante usar um eletrodo compatível com Tris ao ajustar o pH.Os eletrodos de junção única Ag/AgCl podem apresentar instabilidade quando usados com tampões Tris porque a prata gradualmente precipita e entupem o eletrodoA utilização de elétrodos de referência de dupla junção ou calomel assegura medições precisas do pH no tampão Tris.